PKmito ORANGE (PKMO) 活細胞線粒體熒光探針

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

PKmito ORANGE (PKMO)是北京大學(xué)陳知行課題組研發(fā)的PKmitoTM系列染料中的成員之一，兼具明亮的熒光、非常低的化學(xué)毒性和光學(xué)毒性，以及優(yōu)秀的線粒體定位能力的特征。

PKmito ORANGE (PKMO)高特異性標(biāo)記活細胞的線粒體。由于胞內(nèi)分子三線態(tài)淬滅劑COT基團的存在，賦予該探針極其低的光學(xué)毒性，從而使其適合用于線粒體的長時間示蹤。PKMO聚集在線粒體內(nèi)膜（IM），特別適合通過STED超分辨光學(xué)顯微鏡（775nm損耗激光）對線粒體嵴結(jié)構(gòu)和動力學(xué)進行成像觀察。PKMO的最大吸收和發(fā)射波長分別是：591nm和608nm，能用于寬場、共聚焦、SIM或STED顯微鏡。

PKmito ORANGE (PKMO)的重要特征：

j Ab：591nm；Em：608nm；

k 適用于活細胞線粒體的長期成像；

l 不適合用于固定細胞的線粒體染色；

m 兼容于寬場、共聚焦、SIM或STED顯微鏡。

產(chǎn)品特性

保存與運輸方法

保存：≤-20°C避光干燥保存，收到貨至少12個月有效。 

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 本品量非常少，使用前低速離心后直接加適當(dāng)溶劑溶解使用，切勿分裝稱量。

2） 整個染色過程中需注意避光。

3） PKmitoTM產(chǎn)品的商標(biāo)持有者是Genvivo Biotech Co., Ltd.

4） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 儲存液的配制

j 初次使用，請將低溫保存的PKMO（固體）置于室溫回溫至少20min，低速離心3~5min。

k 于超凈臺內(nèi)開蓋，直接往管內(nèi)加入適量高質(zhì)量的無水DMSO使其溶解，配制成250µM（1000×）母液。本染料可以反復(fù)凍融，因此，不建議分裝。每次使用完畢后，請將1000×母液置于≤-20°C 以下避光凍存。但務(wù)必要注意，每次開蓋取樣前，不管是固體還是母液，都必須讓其恢復(fù)到室溫。在正確的溶解和儲存和使用習(xí)慣下，母液至少能穩(wěn)定保存3個月。

a）MX4325-5nmol：往管內(nèi)加入20µl無水DMSO，使其溶解且充分混勻，得到250µM（1000×）母液；

b）MX4325-25nmol：往管內(nèi)加入100µl無水DMSO，使其溶解且充分混勻，得到250µM（1000×）母液；

2. 染色工作液的配制

于實驗前，用37℃預(yù)熱的常用細胞培養(yǎng)基（比如：DMEM+10% FBS）將適量的250µM母液稀釋到250nM（1×）工作液，簡單渦旋或用槍吹勻后備用。染色工作液必須新鮮配制，久置后可能導(dǎo)致部分染料降解或沉淀。染色工作液不可重復(fù)使用。

3. 細胞準(zhǔn)備和染色

j 按常規(guī)方法，在爬片上、玻底培養(yǎng)皿或玻底多孔板中接種和培養(yǎng)細胞。

k 當(dāng)細胞生長到所需密度，用新鮮配制的染色工作液替換舊的培養(yǎng)基，確保染色工作液覆蓋所有的細胞。l 于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中避光孵育15~30min。

m 用37℃預(yù)熱的培養(yǎng)基清洗細胞1~2次，之后更換成不含探針的培養(yǎng)基，即可用于熒光成像。

4. 細胞成像

PKMO染色后的細胞，用580~590nm激發(fā)，收集600~700nm范圍內(nèi)的熒光。也可以根據(jù)具體的實驗（比如：多重染色）來設(shè)置檢測條件。

染色示例（來自文獻，僅做參考）

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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