Frozen-EZ酵母轉(zhuǎn)化試劑盒Ⅱ

產(chǎn)品亮點(diǎn)
快速：可以在不到10分鐘的時間內(nèi)制備具有高轉(zhuǎn)化效率的酵母細(xì)胞。
簡單：用載體DNA在不到1小時的時間內(nèi)用單個或多個質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的簡便方法。
用途廣泛：可與釀酒酵母以及其他真菌（包括白色念珠菌，粟酒裂殖酵母和巴斯德畢赤酵母）一起使用。與環(huán)狀和線性DNA兼容。
  
產(chǎn)品描述

與現(xiàn)有方法相比，F(xiàn)rozen-EZ酵母轉(zhuǎn)化II試劑盒旨在使酵母轉(zhuǎn)化和文庫篩選更加容易和高效。用Frozen-EZ Yeast Transformation II試劑盒制備的酵母細(xì)胞可立即用于轉(zhuǎn)化，或可儲存（即≤-70°C）以備后用。用該試劑盒制備的酵母可以用環(huán)狀和線性DNA轉(zhuǎn)化。另外，F(xiàn)rozen-EZ酵母轉(zhuǎn)化II試劑盒可與其他真菌一起使用，包括白色念珠菌，粟酒裂殖酵母和牧羊犬。
 
 技術(shù)指標(biāo)

感受態(tài)細(xì)胞穩(wěn)定性    -70°C≥1年
處理時間      ≤15分鐘
產(chǎn)品儲存      0-4°C
轉(zhuǎn)化DNA輸入        0.2-1.0微克
轉(zhuǎn)型效率               10 5 – 10 6 CFU /微克質(zhì)粒DNA。

常見問題

Q1：該套件中有什么？它如何工作？

該套件中使用的程序在某種程度上類似于基于鋰陽離子的方法進(jìn)行設(shè)計。不涉及原生質(zhì)球步驟。該機(jī)制可能涉及一些我們尚不完quan了解的代謝途徑。

問題2：此套件可用于白色念珠菌，粟酒裂殖酵母或巴斯德畢赤酵母嗎？

是。根據(jù)其他實(shí)驗(yàn)室和我們實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)，該試劑盒在白色念珠菌，粟酒裂殖酵母或畢赤酵母以及啤酒酵母中也能正常工作。

問題3：我的感受態(tài)酵母細(xì)胞在-70°C以下可以保存多長時間？

在-70°C以下儲存半年后，轉(zhuǎn)換效率不會降低。6個月后，轉(zhuǎn)換效率逐漸開始下降。

Q4：我應(yīng)該如何解凍儲存的冷凍感受態(tài)細(xì)胞？

在室溫下解凍。

問題5：凍結(jié)和解凍的頻率會影響轉(zhuǎn)化效率嗎？

在冷凍的第一個周期后，我們通常會看到轉(zhuǎn)化子增加10-30％。您可以重新冷凍和融化感受態(tài)酵母細(xì)胞3-4次，而對轉(zhuǎn)化效率沒有明顯影響。進(jìn)一步的凍融循環(huán)不利地影響轉(zhuǎn)化效率。

問題6：在轉(zhuǎn)化的第2步中，我是否需要嚴(yán)格在30°C下孵育？

不能。溫度在30°C至37°C之間處于溫度范圍。低于或高于此范圍的溫育會大大降低轉(zhuǎn)化效率。

Q7：是否可以不經(jīng)純化直接使用限制性酶消化的DNA？

是。不同的消化緩沖液對轉(zhuǎn)化效率的影響很小。您應(yīng)該通過提高消化反應(yīng)中DNA的濃度，嘗試將每個轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的DNA體積保持在5 µl。

Q8：我應(yīng)該在選擇性板上撒多少轉(zhuǎn)化混合物？

對于大多數(shù)環(huán)形質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，50 µl就足夠了。但是，如果您使用線性化DNA或使用多個選擇標(biāo)記，則可以在每塊板上上樣多達(dá)200 µl的轉(zhuǎn)化混合物，以增加轉(zhuǎn)化體的數(shù)量。轉(zhuǎn)化子的數(shù)量隨著施加到每個板上的轉(zhuǎn)化混合物的數(shù)量線性增加。

Q9：我需要使用帶有山梨糖醇的平板嗎？

否。請使用適合您實(shí)驗(yàn)的任何平板。

Q10：我需要添加載體DNA嗎？

不需要。不需要載體DNA。

引文

Plasmids were transformed with high efficiency using the Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit in the construction of synthetic yeast promoters. Researchers showed that decreasing nucleosome affinity correlated with increasing promoter strength and expression levels higher than native species.

Curran KA, et. al. (2014) Design of synthetic yeast promoters via tuning of nucleosome architecture. Nat Commun. 5:4002.

The Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit was used to integrate various TEF1 promoter mutants upstream of a gene in Saccharomyces cerevisiae. Efficient transformation allowed comparison of gene activity and, therefore, determination of promoter strength.

Nevoigt, E., et al. (2006) Engineering of promoter replacement cassettes for fine-tuning of gene expression in Saccharomyces cerevisiae. Appl Environ Microb, 72(8): 5266-5273.